1.1×QY Fidelity PCR Mix（QYR0503）
产品名称：1.1×QY Fidelity PCR Mix
货号：QYR0503
产品参数
规格：1.125 ml/支
保存条件：-20℃保存24个月。
适用范围：本产品适用于基因组DNA、cDNA和质粒DNA的PCR扩增，如基因鉴定、基因克隆等实验。
产品简介
本产品为1.1× 即用型快速PCR预混液，内含高保真DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系，只需添加引物和模板即可进行扩增，可有效扩增5 kb以内的DNA片段。体系中包含电泳指示剂，可在扩增完成后直接上样进行电泳检测。
该酶具有5’→3’ 聚合酶活性和3’→5’ 外切酶活性，扩增产物为平末端，可直接用于平末端克隆。
使用方法
操作示例
1. 按照下表，于冰上配制PCR反应体系：
组分
25 μl体系
50 μl体系
终浓度
1.1×QY Fidelity PCR Mix(1)
21~22 μl
43~45 μl
1×
Forward Primer (10 μM)(2)
1.0 μl
2.0 μl
0.4 μM
Reverse Primer (10 μM)(2)
1.0 μl
2.0 μl
0.4 μM
Template DNA(3)
1~2 μl
1~3 μl
-
（1）当需要加入较多的模板时，可相应调整本产品用量，但本产品占比不可低于总体系的85%，Mix含量过低会降低扩增效率。本产品推荐45 μl/50 μl扩增体系。
（2）引物终浓度范围为0.2~0.8 μM，推荐0.4 μM，过少的引物会导致扩增失败或产量极低，过量的引物会增加错配的可能性，导致非特异性扩增。
（3）模板推荐量：
基因组DNA：50~500 ng； 质粒、噬菌体DNA：0.05~1 ng；
cDNA：推荐将反转录产物原液稀释5~10倍后，取1~2 μl作为模板。
注：过量的模板会导致非特异性扩增，过少的模板易导致PCR扩增效率低。
2. 推荐的PCR程序
步骤
温度
时间
循环数
预变性(1)
98℃
2 min
1
变性
98℃
10 s
30~35 cycles(6)
退火
Tm(2)
10~15 s(3)
延伸
72℃(4)
10~15 s/kb(5)
终延伸
72℃
1~5min
1
-
4℃
Hold
-
（1）预变性：扩增较长的片段时，建议使用95℃ 5 min预变性处理，防止对DNA造成额外的损伤。
（2）退火温度：参考引物的Tm值，最适退火温度与引物间的平均Tm值相近，若引物间Tm值偏差较大，建议退火温度设置为引物中Tm较小值+1~2℃。
（注意：若引物上添加有与模板不匹配的碱基序列，如酶切位点、同源臂等，PCR程序设置退火温度时，仅需计算与模板特异性匹配的引物序列的Tm值。）
（3）退火时间：对于含兼并引物、复杂模板的扩增，建议退火时间延长至30 s。
（4）延伸温度：通常为72℃，可根据实际需求在68~75℃范围内调整。
（5）延伸时间：常规模板推荐设置为10~15 s/kb，复杂模板可以将延伸速度增加至20~30 s/kb；略微增加延伸时间有利于提高长片段、低浓度、复杂模板的PCR产量，但总延伸速度不超过30 s/kb。
（6）循环数：30个循环可满足大部分扩增需要，循环数过多易导致非特异性扩增，若扩增条带较弱，可将循环数增加至35~40个。
注意事项
1. 本产品为1.1×PCR预混液，无需额外添加ddH2O。每次反应中该产品用量至少应占到总反应体积的85%，50 μl体系至少使用43 μl PCR Mix，25 μl至少使用21 μl PCR Mix。
2. 请使用高质量的模板进行扩增，如试剂盒提取的基因组DNA。请勿使用dUTP或含尿嘧啶的引物与模板。
3. PCR Mix应避免反复冻融，短期内多次使用可置于4℃保存。
注：本产品仅用于科研用途，不用于诊断和治疗。
