QY qPCR SYBR Green Fast Mix（QYR0501）
产品名称：QY qPCR SYBR Green Fast Mix
货号：QYR0501
产品参数
规格：1.0 ml/支
保存条件：-20℃避光保存12个月。
适用范围：本产品适用于基因组DNA、cDNA、质粒DNA和 λDNA等样本的扩增定量。
产品简介
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂。产品中包含抗体修饰的新型热启动DNA聚合酶和精心优化的Buffer，能有效抑制低温下的非特异性扩增，大大提高了反应特异性和扩增效率，能够在更宽广的范围内进行准确定量。此外，本产品含有独特的校正染料，与一系列qPCR仪器兼容，包括需要ROX校正的仪器，实验过程中无需额外添加染料来校正仪器。
使用方法
操作示例
1. 按照下表，于冰上配制qPCR反应体系：
组分
20 μl体系
终浓度
2×QY qPCR SYBR Green Fast Mix
10 μl
1×
Forward Primer (10 μM)(1)
0.4 μl
0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)(1)
0.4 μl
0.2 μM
Template DNA(2)
As require
-
ddH2O
Up to 20 μl
-
（1）引物终浓度推荐0.2 μM，当反应性能较差时，可在终浓度0.2~1.0 μM范围内调整引物浓度。推荐引物长度25 bp左右、Tm值60℃~65℃为佳，GC含量控制在50%左右、3’ 端最后一个碱基最好为G或C，比对引物避免3’ 端或引物间有非特异性互补。
（2）为保证扩增效率，建议将模板适当稀释后再进行qPCR反应。若模板为cDNA原液，则使用体积不超过qPCR反应总体积的1/10，即2 μl/20 μl体系。
2. 推荐的qPCR程序
·两步法扩增程序
步骤
温度
时间
循环数
预变性
95℃
30 s
1
变性
95℃
10 s
40 cycles
退火/延伸(1)
60℃
30 s
·三步法扩增程序（当模板浓度低或qPCR扩增效率低时可尝试）
步骤
温度
时间
循环数
预变性
95℃
30 s
1
变性
95℃
10 s
40 cycles
退火(1)
55~65℃
10 s
延伸(1)
72℃
30 s
注：溶解曲线使用仪器默认程序即可。
（1）根据引物的Tm值进行退火/延伸（退火）温度的设定；若扩增片段在200bp以内，退火/延伸（延伸）时间可以设置为15 sec；此外，退火/延伸（延伸）时间的设置还需根据您使用的qPCR仪所需要的最短数据采集时间自行调整。
结果分析
1. NTC（No Template Control，无模板阴性对照）：若NTC的CT值大于35或无CT，则体系不存在污染；若CT值小于35，则体系可能存在污染或引物不特异，形成引物二聚体，建议清洁实验环境、更换无菌水、检查引物是否污染，或适当降低引物浓度、优化引物设计。
2. 扩增曲线及CT值：标准扩增曲线呈光滑的“S”型。一般情况下目的基因Ct值在20~30之间，内参Ct值在15~20之间。若Ct值较小，建议稀释模板；若Ct值较大，建议提高模板浓度或增大反应体系；若Ct值大于35，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
3. 熔解曲线：标准熔解曲线呈单峰。若熔解曲线出现双峰或者多峰，可能存在污染、引物二聚体或非特异扩增，建议降低引物浓度或优化引物设计。
注意事项
1. 使用前请充分溶解混匀，尽量避免反复冻融，以免酶活下降；
2. 本产品中含有SYBR Green I，需避光保存，使用时尽量避免强光照射；
3. 为不影响后续实验，建议做预实验检查引物有效性和特异性；
4. 上机前，注意消除体系中的气泡，以免对结果造成影响。
注：本产品仅用于科研用途，不用于诊断和治疗。
