本产品用 E.coli 作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵体,其中的重组蛋白质只完成部分折叠,还没形成最后的正确空间结构,所以没有生物活性,要得到有活性的重组蛋白,还需要后续的溶解和复性(重折叠)处理。
采用温和法溶解包涵体,释放的包涵体蛋白质不彻底变性,还能保持其部分折叠的结构,使后续的复性处理效率提高。包涵体变复性是通过特定技术处理细菌表达产生的无活性蛋白凝聚物的过程。包涵体主要由超过50%的重组蛋白及核糖体元件、质粒DNA等杂质组成,需经破菌、洗涤、溶解三步处理后,采用稀释复性、柱上复性等方法恢复蛋白活性。该现象主要由基因工程菌表达产率过高、重组蛋白含硫氨基酸比例大及缺乏折叠辅助因子导致。复性过程需在pH 8.0-9.0缓冲液中通过氧化还原系统调控二硫键形成,常规复性效率约20%,柱上复性可通过五倍稀释实现90%以上回收率。低浓度变性剂洗涤和分子伴侣应用可有效提升复性产率。