蛋白 G抗体纯化试剂盒

名称：蛋白G抗体纯化试剂盒

英文名称：ProteinG-agarose Antibody Purification Kit

目录号：QYP1053A (1ml) ，QYP1053B (6ml)， QYP1053C (12ml)

存条件：室温（15-25℃), 4℃

保质期：1 年 

包含试剂：

试剂盒组成	试剂盒组成英文名称	QYP1053A (1ml)	QYP1053B (6ml)	QYP1053C (12ml)
ProteinG-琼脂糖凝胶预装柱	ProteinG-agarose Column	1ml 凝胶约0.5ml	6ml 凝胶约3ml	12ml 凝胶约6ml
抗体纯化平衡液	IgG Balance Buffer	20mL	100ml	200ml
抗体纯化洗涤液	IgG Wash Buffer	10ml	50ml	100ml
抗体纯化洗脱液	IgG Elution Buffer	10ml	50ml	100ml
抗体纯化中和液	IgG Neutralization Buffer	1ml	5ml	10ml

保存条件：Protein G-琼脂糖凝胶预装柱4℃保存，其他组分室温保存。

 产品介绍：

蛋白G抗体纯化试剂盒用于实验室的常规抗体亲和纯化操作（单抗、多抗）。每根柱子可至少反复使用9 次。含抗体（IgG）的样本（血清、腹水、细胞培养上清）流经Protein G -琼脂糖凝胶柱，样本中的IgG 与Protein G -琼脂糖凝胶特异性结合，非IgG组分则不与柱子结合。

蛋白 G 是源自链球菌的细胞壁蛋白，在大肠杆菌中以重组形式生产。与蛋白A相同，蛋白G可与大多数哺乳动物的免疫球蛋白结合，结合部位主要为其Fc区。天然蛋白G包含两个免疫球蛋白结合位点以及白蛋白和细胞表面结合位点。重组形式的蛋白G中已除去这些白蛋白及细胞表面结合位点，以减少免疫球蛋白纯化过程中的非特异性结合。重组蛋白G分子量约为21.6kDa，但在SDS-PAGE中表观大小为31至34kDa。IgG 结合功能在 pH 值为 5 时较佳，但在近中性条件（pH 值 7.0 至 7.2）下也可高效结合。

蛋白 G 可与人、小鼠和大鼠血清中更广泛的 IgG 亚类结合。其中，除了与蛋白A一样能够结合其他类型免疫球蛋白之外，蛋白G还对人IgG3、小鼠IgG1和大鼠的全部三种IgG亚型具有特别强的结合能力。因此，在涉及这些物种和抗体亚型的应用中一般建议采用蛋白G。关于其他物种，蛋白 G 对牛、山羊和绵羊 IgG 的结合能力更强，但对猪、豚鼠、犬和猫 IgG 的结合能力弱于蛋白 A。蛋白 G 琼脂糖可从许多哺乳动物物种的血清和其他液体中有效地亲和纯化 IgG。除了来自人、山羊和绵羊样品的大多数 IgG 同种型外，蛋白 G 还特别适用于纯化小鼠IgG（包括 IgG1）。
    样本经洗涤液洗涤除杂后，加入洗脱液洗脱IgG，并用中和液调节pH 。本试剂盒内含1 根Protein G-琼脂糖凝胶柱，每ml 凝胶可结合约10mg 人类IgG 或约7mg小鼠IgG。

实验例

实验名称：Protein G -agarose  抗体纯化试剂盒纯化抗体 

试剂准备：

每1-2ml 血清或腹水采用1ml Protein G -agarose 进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS 透析之后再进行过柱纯化。

上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min ，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um 滤器过滤，之后上柱。

     如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。

实验方案

以1ml 血清使用1ml Protein G -agarose  柱子纯化为例

1.    拔下Protein G -琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。

2.    用10ml 平衡液洗柱子。

3.    将预先处理过的血清上柱。用50ml 离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3 次。

4.    用10ml 洗涤液洗柱子。

5.    取7 个1.5ml 离心管，每管加入100ul  中和液。

6.    加入10ml 洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP 管中，每管收集900ul ，总体积1ml。

7.    洗脱液自然流出后，用10ml 平衡液洗柱子。

8.    使用后的柱子应加入