Glutathione Agarose Beads 4FF（GST标签蛋白纯化填料）（QYP1040）

产品名称：谷胱甘肽偶联琼脂糖珠；GST标签蛋白纯化填料

英文名称：Glutathione Agarose Beads 4FF

货号：QYP1040

 

产品参数：

规格：10ml，20ml，其他规格

储存形式：50%蛋白纯化填料混悬液

保护液：20%乙醇

储存温度：2-8℃

 

产品简介：

谷胱甘肽配体与高度交联的4%琼脂糖结合。这种结合方式经过优化，能够为GST标签蛋白及其他谷胱甘肽结合蛋白提供高结合能力。 总结合能力约为每毫升介质结合10毫克重组GST标签蛋白。动态结合能力会因多种因素而变化，如目标蛋白、流速等。 如果需要去除GST标签（一种天然存在的蛋白质，分子量为26,000），可以在蛋白结合到谷胱甘肽琼脂糖填料时，使用适当的位点特异性蛋白酶进行消化，或者在洗脱后进行消化。对于结合在柱上/散装介质上的GST标签蛋白进行切割，可以省去将释放的蛋白与GST分离的额外步骤，因为GST标签仍然保持结合状态。切割后的目标蛋白使用结合缓冲液进行洗脱。

 

技术指标：

外观：白色半透明凝胶

基质：高度交联的4%琼脂糖

配体：谷胱甘肽

蛋白质载量：约10mg(GST标签蛋白)/ml(介质)

最大流速：≧250cm/h

耐反压：≤0.3MPa

平均粒径：90μm

工作温度：4-30℃

基质pH稳定性：2-12（短时间）；2-8（长时间）

实验方案：

（一）缓冲液准备：

1. 用于配制缓冲液的水和化学试剂应具有高纯度。建议在使用前通过0.45 μm滤膜过滤缓冲液。

2. 结合缓冲液：PBS，pH 7.3（140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na₂HPO₄，1.8 mM KH₂PO₄，pH7.3）

3. 洗脱缓冲液：50 mM Tris-HCl，10mM 还原型谷胱甘肽（GSH），pH 8.0。（GSH的浓度需要根据目标蛋白的结合能力进行适当调整，GSH易被氧化，现用现配）

注意：结合缓冲液和洗脱缓冲液中可加入1至10mM DTT（二硫苏糖醇），可提高部分蛋白的稳定性和结合载量。

（二）样品准备：

在上样前，样品应离心和/或通过滤膜过滤。

如果样品过于粘稠，可用结合缓冲液稀释，以防止柱子堵塞。

（三）柱纯化：

1. 装柱：将GST-标签蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取一定体积的GST-标签蛋白纯化填料混悬液，加入层析柱空柱。待液体流出后（柱床体积为混悬液的50%），向层析柱中加入PBS，将上层筛板置于层析柱顶部，小心向下推直到接触填料表面，压实。筛板和填料层之间不要有气泡。

2. 平衡：向层析柱中加入10倍柱床体积的结合缓冲液，（如柱床体积为2ml，加20ml结合缓冲液）清洗柱子。

3. 上柱：将样品加入层析柱。用离心管接住流穿液，反复上柱3次，使样本中的GST-标签蛋白与纯化填料充分结合。

4. 洗涤：向层析柱中加入5-10倍柱床体积的结合缓冲液，清洗柱子，除去非特异性结合的杂蛋白，保留流穿液用于结合效率分析。

5. 洗脱：向层析柱中加入5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液，洗脱目的蛋白。用离心管接住流出的目的蛋白。

6. 清洗：

（1）沉淀或变性蛋白：用2倍柱床体积的6M盐酸胍清洗，随后用5倍柱床体积的PBS冲洗。

（2）疏水结合物：用3-4倍柱床体积的70%乙醇或2倍柱床体积的1% Triton X-100清洗，随后5 倍柱体积PBS冲洗。

7. 存储：装填柱于4-30℃下以20%乙醇保存。

注：本产品仅用于科研用途，不用于诊断和治疗。