DH5α超级感受态 (QYV101)

产品名称：DH5α超级感受态；DH5α热激感受态；DH5α competent cells；DH5α super competent cells

货号：QYV101

 

主要参数

基因型：F⁻ φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rₖ⁻, mₖ⁺) supE44 thi-1 gyrA96 relA1 phoA

规格：100μl /支

保存条件：-80℃保存

保质期：6个月

 

产品特点

DH5α 是一种广泛使用的 大肠杆菌（E. coli）感受态细胞，专门优化用于分子克隆、质粒扩增和重组DNA实验。由于其高转化效率和稳定的质粒复制能力，DH5α成为实验室中最常用的克隆菌株之一。

1. 高转化效率：通常可达 10⁷~10⁸ CFU/μg 超螺旋质粒DNA（如pUC19），适合高效克隆。

2. 重组缺陷（recA1）：减少质粒与外源DNA的同源重组，提高克隆稳定性。

3. 核酸酶缺陷（endA1）：减少质粒提取时的DNA降解，提高质粒产量和纯度。

4. 蓝白斑筛选（α互补）：携带 lacZΔM15 突变，可与携带lacZα片段的载体（如pUC、pBluescript）进行蓝白斑筛选。

5. 限制系统缺陷（hsdR17）：避免外源DNA被宿主限制酶降解，提高转化效率。

 

应用方向

1. 常规克隆：连接产物的转化、质粒构建。

2. 质粒扩增：高拷贝质粒（如pUC、pET、pGEX）的制备。

3. 蓝白斑筛选：用于重组质粒的鉴定（如pUC系列载体）。

4. 基因文库构建：适用于高通量克隆实验。

实验方案

1. 将含有DH5α 超级感受态（100μl /支）的离心管从-80℃取出，放冰上融化。

2. 向离心管中加入10ng目的DNA（质粒或连接产物），吹打混匀，在冰浴中静置30分钟。

3. 将离心管从冰浴取出，放入42℃水浴90秒，之后迅速转移到冰浴中静置2分钟，注意期间不要摇动离心管。

4. 向离心管中加入900μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），37℃ 160rpm震荡培养40-60分钟。

5. 取200μl培养物，在酒精灯旁边进行无菌操作，涂相应的抗性或者选择平板。将涂布好的平板倒置放入37℃培养箱中培养过夜（12-16小时）。

备注：培养基中添加的抗生素与质粒所带的抗生素抗性基因一致。例如pEGFP-N1质粒带有卡那抗性，LB平板需预先添加卡那霉素。

 

注意事项

1. 未使用的感受态细胞应始终保存在-80°C，避免反复冻融（每冻融一次效率下降约50%）。

2. 解冻后需立即使用，不可重新冷冻。

3. 加DNA后轻弹管壁混匀，不可涡旋或剧烈吹打（会损伤细胞膜）。

4. 若进行蓝白斑筛选，平板需提前涂布 X-Gal 和 IPTG（避光保存）。

 

 

注：本产品仅用于科研用途，不用于诊断和治疗。