甘油三酯（triglyceride,TG）含量测定试剂盒--微量法 (QYT5288)

产品名称：甘油三酯（triglyceride,TG）含量测定试剂盒--微量法

货号：QYT5288

规格：100T/96S

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义：

TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

测定原理：

用异丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油与三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H₂O₂，过氧化物酶催化H₂O₂氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm处有特征吸收峰。

 

需自备仪器和用品：

可见光分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、可调式移液枪、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体120 ml×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体12 ml×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体12 ml×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂5mg×1支，4℃保存；临用前加5ml试剂一，即1mg/ml甘油三酯标准溶液，-20℃分装保存2周，避免反复冻融。（注：若粉剂不易溶解，可置于4℃摇床轻柔振荡至完全溶解）

 

样本处理：

1. 组织中TG的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入 1ml试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。

2. 细胞、细菌中TG的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清，加1ml试剂一， 超声波破碎1min（强度20%，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清，即TG待测液。

3. 血清（浆）等液体样本：直接测定。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到505 nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 操作表：（在EP管中进行下述实验）

试剂（μl）	空白管	测定管	标准管
样本	-	10	-
标准品	-	-	10
试剂一	10	-	-
试剂二	95	95	95
试剂三	95	95	95
混匀，室温下静置20min，于505nm波长处读取吸光值，记为A空白管、A测定管和A标准管，ΔA测定=A测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需测1-2次。