病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（离心柱型）

产品名称：病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（离心柱型）；Virus Genomic DNA/RNA Kit

货号：QYM124

产品内容：

名称	50T	储存条件	使用方法及注意事项
Buffer GL	15ml	室温保存	-
Buffer GW1 (concentrate)	13ml	室温保存	首次使用前加入无水乙醇17ml
Buffer GW2 (concentrate)	15ml	室温保存	首次使用前加入无水乙醇45ml
Buffer RE	10ml	室温保存	-
Proteinase K	1ml	-20℃保存	-
Spin Columns With Collection Tubes	50	室温保存	-

自备试剂：无水乙醇(CAS：64-17-5)；0.9% NaCl溶液

 

产品简介

本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清、病毒原液、鼻咽拭子和无细胞体液中提取高质量的病毒DNA/RNA。独特的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒，降解蛋白，DNA/RNA吸附于硅基质膜上，通过快速的漂洗、离心步骤，去除杂质，得到高纯度的病毒DNA/RNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，所得病毒DNA/RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR、RT-PCR、Real-Time qPCR、印迹等分子生物学实验。

 

产品特点

1. 简便快速：1小时内可获得高纯度的病毒DNA/RNA；

2. 安全：无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，使用安全；

3. 稳定：所得病毒DNA/RNA纯度高，重复性好，方便下游应用。

 

注意事项

1. 样品避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的DNA/RNA片段小，提取量下降。

2. 如Buffer GL、Buffer GW1结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。

3. 所有离心步骤均为室温下操作。

实验操作

1. 取1.5ml离心管（自备），加入20μl Proteinase K。

2. 向离心管中加入200μl血清或血浆。加入200μl Buffer GL，涡旋震荡15秒。

注意：(1) 样本体积不足200μl可以加入0.9%NaCl（自备）补足。

(2)为确保样本有效裂解，加入Buffer GL后，需将样本与Buffer GL充分混匀。

3. 56˚C 孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

4. 加入250μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温放置5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

注意：如果环境温度超过25˚C，无水乙醇应在冰上预冷后使用。

5. 将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入500μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。

8. 向吸附柱中加入500μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9. 12,000 rpm 离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

10. 将吸附柱置于一个新的灭菌的1.5ml离心管中（自备，若提取RNA，则需要RNase-free离心管），向吸附柱膜的中间部位悬空加入30-100μl Buffer RE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000rpm离心1分钟，收集核酸溶液。

注意：(1) 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。

(2) 如需长期保存，请将DNA溶液置于-20˚C保存，RNA溶液置于-70˚C保存。

(3) 如果要提高DNA/RNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA/RNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10。