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高效RIPA裂解液(组织/细胞)  
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商品基本信息:

中文名称:高效RIPA裂解液(组织/细胞) 

英文名称:RIPA cell lysis buffer

目录号:QYR020

规格:100ml  30ml

保存条件:4℃

保质期:1年

产品描述:

RIPA细胞裂解液是一种用于培养的哺乳动物细胞的细胞裂解试剂,可从各类实验室培养的哺乳动物细胞中高效裂解并提取蛋白质,包括贴壁细胞和悬浮细胞。本试剂可提取各种细胞质、细胞膜、细胞核蛋白。本试剂可与很多实验应用兼容,包括BCA蛋白定量,WB,IP,ELISA,蛋白纯化等。本品含0.1%SDS,为强效裂解液,本品不含蛋白酶抑制剂与磷酸酶抑制剂,如实验需要可额外添加。

本试剂主要成分为:Tris-HCl pH8.0,  NaCl, Ttiton-100,sodium deoxycholate, 和 SDS.

如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者40度水浴使沉淀溶解。

推荐使用浓度:

6孔板每孔细胞加入100ul本试剂。如果细胞密度非常高,可以加大裂解液的用量到150-200ul。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

实验例

对于培养细胞样品:

1. 取适当量的RIPA细胞裂解液,加入PMSF及其他的蛋白酶抑制剂。

2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用胰酶消化细胞或用细胞刮刀刮除细胞。用 PBS清洗细胞1次。按照 6 孔板每孔加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,用 PBS清洗细胞1次。用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。

吹打混匀。冰上静置20min,每5min使用漩涡混匀器混匀1次。

P.S.充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,比较容易裂解充分。

3. 12000rpm, 4℃,离心10min。将上清转移到新的EP管中。即可进行后续的 Western,IP,co-IP等实验。

对于组织样品:

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 取适当量的RIPA细胞裂解液,加入 PMSF及其他的蛋白酶抑制剂。

3. 按照每 20 mg组织加入 100-200ul裂解液的比例加入裂解液。

P.S.如果裂解不充分,可以适当添加裂解液;如果需要更高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆,冰上静置,直至充分裂解。

5. 12000rpm, 4℃离心10min。将上清转移到新的EP管中。即可进行后续的Western,IP,co-IP等实验。

P.S.每 20mg 冻存的小鼠肝脏组织用 200 ul本试剂裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/ml,不同状态的不同组织有所不同。

6.如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,漩涡混匀器混匀,使样品裂解充分。离心取上清,用于后续实验。

其他技术信息

更多信息请下载和查阅产品说明书。

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