His-标签蛋白纯化（Ni-NTA柱法）试剂盒（变性）

名称：Ni-NTA蛋白纯化试剂盒（变性）

英文名称：Ni-NTA Protein Purification Kit (Denaturing)

目录号：QYP1063

保存条件：室温（15-25℃），4℃

保质期：1年

包含试剂：

产品介绍

试剂盒1ml装 包括1根1ml Ni-NTA琼脂糖凝胶预装柱。

试剂盒5ml装 包括1根 6ml Ni-NTA琼脂糖凝胶预装柱。

Ni-NTA蛋白纯化试剂盒（变性）用于实验室的His标签融合蛋白包涵体表达纯化。表达菌株经IPTG诱导表达蛋白、超声破碎、离心分离后的沉淀，使用8M尿素溶解，流经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱，样本中的His标签蛋白与Ni-NTA琼脂糖凝胶特异性结合，其他杂蛋白则不与柱子结合。样本经变性洗涤液洗涤除杂后，加入变性洗脱液，洗脱His标签蛋白。装柱后每根凝胶柱柱床体积为1ml，可特异性结合5-10mg的His标签蛋白。单次蛋白纯化得率因蛋白种类、蛋白分子量大小而异。包涵体表达蛋白与Ni-NTA琼脂糖凝胶柱的结合率略低于上清表达蛋白。每根Ni-NTA琼脂糖凝胶柱可反复使用8-10次，其His标签蛋白结合效率不会显著降低。

如需进行可溶性蛋白纯化，请购买Ni-NTA蛋白纯化试剂盒(非变性)(QYP1062)。如需要本试剂盒纯化试剂补充装，请购买Ni-NTA蛋白纯化试剂盒（变性）（补充装）（QYP1065）。

实验例：

实验名称：His-标签蛋白的过柱纯化（变性）

1.溶解：将含有目的蛋白的样本（超声破碎沉淀）以1/10体积重悬于变性裂解液中（例：100ml菌体收获的沉淀使用10ml变性裂解液重悬），在旋转摇床上室温溶解1h-2h，大部分沉淀应溶解。

2.离心：将溶解的样本10000g室温离心10min。收上清。

3. 装柱：将Ni-NTA蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取2mlNi-NTA凝胶混悬液，加入层析柱空柱。待液体流出后（柱床体积1ml），向层析柱中加入PBS，将上层筛板置于层析柱顶部，小心向下推直到接触凝胶表面，压实。筛板和凝胶层之间不要有气泡。

备注：如试剂盒中是Ni-NTA蛋白纯化预装柱，无需进行装柱。

4.平衡：用10ml变性平衡液洗柱子。

5. 上柱：将步骤2所得上清加入层析柱。接住流穿液，反复上柱3次，使His标签蛋白与Ni-NTA填料充分结合。

6. 洗涤：用10ml变性洗涤液洗柱子

7. 洗脱：用7ml洗脱液洗脱目的蛋白。将样本收集到1.5ml EP管中，每管1ml。

8. 再生：用10ml变性平衡液洗柱子。

9. 保存：使用后的柱子应加入20%乙醇-PBS，盖上上下盖，直立保存在4℃。

10. 洗脱下来的蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳鉴定其浓度和纯度。

实验结果举例：