蛋白AG抗体纯化试剂盒

名称：蛋白AG抗体纯化试剂盒

英文名称：PAG-agarose Antibody Purification Kit

目录号：QYP1055A (1ml)，QYP1055B (5ml)

保存条件：室温（15-25℃），4℃

保质期：1年

包含试剂：

保存条件：PAG-琼脂糖凝胶预装柱4℃保存，其他组分室温保存。

产品介绍：

蛋白AG抗体纯化试剂盒用于实验室的常规抗体纯化操作（单抗、多抗）。每根柱子可反复使用9次。含抗体（IgG）的样本（血清、腹水、细胞培养上清）流经PAG-琼脂糖凝胶柱，样本中的IgG与PAG-琼脂糖凝胶特异性结合，非IgG组分则不与柱子结合。样本经洗涤液洗涤除杂后，加入洗脱液洗脱IgG，并用中和液调节pH。本试剂盒内含1根(QYP1055A)，5根(QYP1055B) PAG-琼脂糖凝胶柱，柱床体积为1ml，可结合10-20mg人类IgG或6-8mg小鼠IgG。

PAG-琼脂糖凝胶是重组蛋白A蛋白G融合蛋白（PAG）与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。与单独的蛋白A或蛋白G琼脂糖凝胶相比，本品具有更宽广的结合范围，可以与人类、小鼠、大鼠、兔等多物种各亚型IgG结合。适用于抗体纯化，包括人类IgG, 小鼠IgG, 兔IgG单抗和多抗的纯化和检测。PAG-琼脂糖凝胶结构稳定，结合IgG效率高，对纯化体系pH值要求不严格，允许在pH5.0-8.0之间进行结合。

实验例

实验名称：PAG-agarose 抗体纯化试剂盒纯化抗体

试剂准备：

每5-10ml血清或腹水采用1ml PAG-agarose进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS透析之后再进行过柱纯化。上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um滤器过滤，之后上柱。

如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。

实验方案

以10ml血清使用1ml PAG-agarose 柱子纯化为例

1. 拔下PAG-琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。
2. 用10ml平衡液洗柱子。
3. 将预先处理过的血清上柱。用50ml离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3次。
4. 用10ml洗涤液洗柱子。
5. 取7个1.5ml离心管，每管加入100ul中和液。
6. 加入10ml洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP管中，每管收集900ul，总体积1ml。
7. 洗脱液自然流出后，用10ml平衡液洗柱子。
8. 使用后的柱子应加入20%乙醇/PBS，盖上上下盖，直立保存在4℃。
9. 洗脱下来的抗体，立刻使用PBS在4℃透析。如不立刻进行透析，需-20℃冻存。请勿将抗体存放于洗脱液中长期保存在4℃。有部分抗体可能会产生沉淀。
10. 纯化好的抗体可用BCA蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳鉴定其浓度和纯度。