传代细胞培养简介

广义的传代细胞培养一般包括复苏、换液、传代、冻存四个环节，是最基本、最常用的细胞培养技术。传代培养是利用培养细胞进行各种实验的必经过程，同时也是一种将细胞种保存下去的方法，广泛应用于生命科学基础研究和生物医药产业。狭义的传代细胞培养只是指传代过程。

传代细胞培养原理

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

传代细胞培养步骤

1、复苏 
（1）取适量培养液加入离心管中；
（2）将冻存的细胞在37℃水浴中快速使其融化；
（3）将细胞吸入离心管中，1000rpm/min离心5 min,倒去上清液，规定加入培养液，打匀，转移到培养瓶中，即可。
2、换液 
（1）将培养瓶中已变色的培养液倒掉；
（2）用PBS洗涤培养瓶（从没有细胞的一侧倒掉）；
（3）加入新鲜培养液，即可。
3、传代
（1）吸除培养瓶内旧培养液，加入适量PBS洗一次。
（2）向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。
（3）置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。
（4）吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失。如果细胞已脱离瓶底，则直接加入培养液终止消化。
（5）用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
（6）计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。或者按照所购买公司推荐的比例传代。
4、冻存
（1）预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
（2）将培养瓶中已变色的培养液倒掉；用适量PBS洗涤一次培养瓶； 
（3）加入胰酶，静置，待细胞将脱落时，加入适量培养液，将贴壁细胞吹落，吸入到离心管中，1000rpm/min×3min，倒掉上清液，加入1ml冻存液，轻轻吹打成细胞悬液，吸到冻存管中，密封，标记冻存细胞名称和冻存日期。
（4）放入细胞程序降温盒中，于-80℃冻存过夜。然后转移至液氮中，长期保存。