血清常见问题

如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

建议血清应保存在-2O℃。若一次无法用完一瓶，无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。将血清从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之缓慢融解，一般是融解过夜。

血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?

沉淀主要成分是纤维蛋白和脂蛋白，不会影响血清品质，但必须去除，因为沉淀会影响细胞与细胞之间的联系，诱导细胞聚集，影响细胞贴壁等。

解冻后，首先混匀血清，4℃静置30min - 1h，让沉淀自然沉降到瓶底，中上层无沉淀血清直接转出使用，下层血清装到50ml无菌离心管， 1000rpm（约400g），离心3分钟即可除去 。当沉淀较少且较难离心去除时（一般是脂蛋白），建议过滤去除。

实验室如何选择适合的血清?

稀有的澳洲血清培养娇贵细胞（小鼠ES、原代细胞分离培养），南美血清或国产胎牛血清用于癌细胞、常规细胞系培养（用量最大），新生牛血清用于病毒包装（构建稳转细胞株）。

培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在2周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;

(2)血清质量不好，反复冻融的结果;

(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

(4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。