一、服务内容

1、细胞转染和稳定表达细胞株筛选

通过转染试剂或电穿孔等方式，将目的基因导入贴壁细胞或悬浮细胞24-48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系，可根据不同基因载体中所含的抗性标记，选用相应的抗生素对靶细胞进行筛选，从而得到稳定表达外源基因的细胞克隆。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能。

2、针对不同种类细胞使用药物，低氧，压力等外源因素进行刺激等处理，建立相关的细胞模型，从而进行后续的研究工作。

二、样品要求（样品处理及保存见附件）

1干冰运输：取对数生长期的细胞，消化后低速离心1000rpm，5min收集细胞，加入适量配制好的冻存液后吹打均匀。将细胞分装入冻存管中，标明细胞的名称、细胞代次、冻存时间及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，放置于程序降温盒内-80℃过液，然后放入液氮罐；细胞数目不少于5×10⁶/ml；

2常温运输：细胞贴壁覆盖瓶底面积达40%以上时，装满培养液，瓶口用封口膜封好，装入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞满，让瓶子固定在盒子中。

三、服务特点

1、针对不同细胞系筛选合适的转染试剂和质粒浓度配比，提高转染效率和蛋白表达量

2、丰富的抗生素筛选经验和单细胞克隆鉴定方法提高实验效率

3、构建的稳定表达细胞株可稳定传代，极少发生性状丢失

四、收费标准

五、客户提供材料

1、待克隆基因和载体信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如无相关shRNA序列信息，本公司可代为设计并收取相关费用）；

2、待转染细胞株（如需使用常用肿瘤细胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；

3、阳性对照样品（尽量提供）

4、相关文献（可选）

六、提交给客户结果

1、构建完成的载体和甘油菌株；

2、完整测序报告和序列碱基图

3、载体真核表达鉴定结果

4、载体真核表达蛋白

5、稳定表达细胞株>1×10⁷

6、稳定敲低细胞株>1×10⁷

7、完整实验报告（包括基因扩增图，细胞株过表达和敲低检测结果图等）