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反转录PCR/实时荧光定量PCR检测 RT-PCR/Real time-PCR 目录号:QY-01

T-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团(如SYBR荧光染料),利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

注解:SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

服务流程

  1. 从样本中提取总RNA,
  2. 引物/探针设计及合成,
  3. 合成cDNA第一链,
  4. 以cDNA为模版,分别扩增目的基因和内参基因
  5. 定性:PCR产物的凝胶电泳和差异分析,

   荧光定量:构建标准品的标准曲线,溶解曲线,扩增曲线,计算各样本的拷贝数。

备注:请提供足够量的样品(100mg组织块或107个细胞或0.5ml血清),动物组织、植物组织等取样后需液氮速冻;细菌、细胞样品需新鲜培养。

提供结果

  1. 总RNA的质量(电泳图片28S/18S ,A260/A280)
  2. 定性:PCR产物电泳图片,半定量结果分析

定量:目的基因和内参基因的溶解曲线图、扩增曲线图,ct值,相对表达量

 

服务费用

项目

价格

定性PCR(琼脂糖电泳检测)

¥100元/样本/基因

荧光定量PCR(SYBR GREEN 3复孔)

¥120元/样本/基因

荧光定量PCR(Taqman,3复孔)

120元/样本/基因

引物设计,合成

¥100元/对

探针设计,合成

¥1500元/条

microRNA检测(SYBR GREEN  3复孔)

¥150元/样本/基因

 

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